Послеродовая гемоглобинурия коров. Гемоглобин в крови животных

Уменьшение количества эритроцитов и гемоглобина в единице объема крови называется Анемией. Она бывает абсолютной и относительной. Абсолютная полицитемия развивается вследствие раздражения красного костного мозга, при заболеваниях легких (эмфизема), сердца (пороки сердца). Относительная полицитемия развивается в условиях обезвоживания организма (при усиленном потоотделении, поносах, рвоте) В зависимости от причины происхождения различают несколько видов анемий: постгеморрагическая, гемолитическая, алиментарная, инфекционная, злокачественная.

Качественные изменения эритроцитов:

Гипохромазия - появление эритроцитов со слабой окраской, обусловленной малым содержанием гемоглобина. Такие эритроциты появляются после кровопотерь.

Гиперхромазия - появление эритроцитов с более интенсивной окраской чем в норме. Обусловлено это явление большим чем в норме содержанием гемоглобина в эритроцитах. Наблюдается при токсической и злокачественной анемии.

Полихромазия - способность эритроцитов окрашиваться и кислыми и основными красками. Это явление связано с наличием в протоплазме эритроцитов участков разной степени зрелости.

Пойкилоцитоз - наличие эритроцитов разной формы (в виде гири, запятой, грушевидные, овальные). Возникают эти формы в самой крови из менее стойких эритроцитов.

Анизоцитоз - появление эритроцитов разных размеров (микро-и макроцитов). Пойкилоцитоз и аишоцитоз свидетельствуют о функциональной недостаточности работы костного мозга.

Включения в эритроцитах могут быть как остатки ядерной субстанции - (Тельца Жолли ) или ядерной оболочки (Кольца Кабо ).

К включениям относятся и базофильная пунктация - мелкая зернистость синего цвета. Наблюдается при отравлении солями тяжелых металлов (солями свинца).

Патология красной крови

Цель занятия . Изучить нарушения, возникающие в животном организме при изменении количества крови, количественного и качественного состава ее форменных элементов

Задание 1 . Изучить последствия изменений общей массы крови у животных. Влияние гиперволемии на кровообращение в сосудах языка лягушки.

Оснащение: Препаровальные дощечки, Булавки, кюветы, микроскопы; шприцы на 5 мл с иглой, глазные пипетки; раствор Рингера (100 мл), 10%-ный раствор этилового спирта (300 мл); лягушки.

Постановка опыта . Лягушку наркотизируют алкоголем, помещают на препаровальную дощечку брюшком вверх. Булавками фиксируют верхнюю челюсть у края круглого отверстия и все четыре лапки. Иссекают кожу и грудную кость над областью сердца для лучшего доступа к сердечной мышце. Из ротовой полости осторожно извлекают язык, расправляют его над отверстием. Препарат кладут на предметный столик стереоскопического или обычного микроскопа. Изучают микроскопическую картину кровоснабжения ткани языка. В полость желудочка вводят 5-6 мл раствора Рингера и наблюдают за характером кровотока. Обращают внимание на скорость движения крови, число функционирующих сосудов, количество форменных элементов в осевом слое тока крови. Сопоставляют с исходным кровотоком.

Оформление протокола опыта . Записывают ход эксперимента. Отмечают изменения кровотока, возникшие после существенного увеличения объема циркулирующей крови.

В опытах на животных изучить изменения количественного и качественного состава эритроцитов

Моделирование и изучение гемолитической анемии у животных.

Оснащение : клетки для кроликов; кюветы; шприцы на 5 мл с иглой; смесители для красной крови; микроскопы; камеры Горяева; электрофотоколориметр; стандартный набор для определения гемоглобина гемоглобинцианидным методом; гемометры Сали; аппараты Панченкова для определения СОЭ; вата (50 г); фильтровальная бумага (30 г); 5%-ный раствор фенилгидразина (20 мл); 70%-ный раствор этилового спирта (20 мл); 1%-ный раствор натрия хлорида (70 мл); 0,1 н. раствор хлористоводородной кислоты (5 мл); 5%-ный раствор лимоннокислого натрия (5 мл); подопытные животные: кролики или животные с анемией (поросята).

Постановка опыта . На кролика массой тела более 2 кг действуют гемолитическим ядом - фенилгидразином, вызывающим тяжелую форму анемии. За четыре дня до занятий кролику в краевую вену уха в течение трех дней подряд вводят 1%-ный раствор фенилгидразина из расчета 1 мл на 1 кг массы тела. В день занятий измеряют ряд показателей красной крови у подопытного и контрольного кроликов. Можно использовать анемичных поросят.

Пробы периферической крови берут из сосудов уха, для чего выстригают шерсть, кожу протирают спиртом, после высыхания прокалывают краевую вену уха иглой, вытекающую кровь используют для анализов.

Определение числа эритроцитов. В абсолютно чистый и высушенный смеситель для красной крови набирают кровь до метки 0,5. Манипуляцию взятия проводят быстро. При этом следят, чтобы не попали пузырьки воздуха. После взятия крови кончик капилляра быстро вытирают ваткой или фильтровальной бумагой, погружают в сосуд с 1%-ным раствором натрия хлорида и набирают до метки 101. Смеситель закрывают с обоих концов большим и средним пальцами рук и осторожно встряхивают содержимое в течение 1-2 мин для получения равномерной взвеси эритроцитов. Получают разведение крови в 200 раз. Подсчет форменных элементов красной крови осуществляют в камере Горяева (рис.17), которую предварительно покрывают шлифованным стеклом, притертым до появления радужных кругов (ньютоновых колец). Из меланжера (смесителя) удаляют на ватку три первые капли содержимого, а затем одну капельку взвеси эритроцитов подводят под среднюю пластинку камеры, куда жидкость поступает в силу капиллярности. Между покровным стеклом и пластинкой не должно быть пузырьков воздуха.

Поверхность сетки раз-делена на большие и малые квадраты. Часть больших разделена на 16 малых квадратов, площадь каждого составляет 1/400 мм2, высота всех камер равна 1/10 мм. Таким образом, объем малого квадрата 1/4000 мм. Подсчет клеток проводят под малым увеличением микроскопа в пяти больших квадратах, начиная с левого квадрата по диагонали. Считают эритроциты расположенные в каждом маленьком квадрате, и те, которые касаются левой и верхней стенок. Эритроциты, касающиеся правой и нижней стенок, не учитывают.

Для определения числа эритроцитов в 1 мкл крови (X ) Используют формулу

Где А - Число эритроцитов в пяти больших квадратах; B – степень разведения крови (1: 200); В – Количество маленьких квадратов в пяти больших (80); 4000 - 1/4000 объема счетной камеры над маленьким квадратом, мкл.

Для определения числа эритроцитов в 1 л крови (X ) Используют формулу Х=А – 1010.

Получают величину Т/л, где Т - Тера, равна 10 .

Определение количества гемоглобина. Наиболее точен гемогло-бинцианидный колориметрический метод. Для анализа берут опытную, стандартную и контрольную пробы. Для подготовки опытной пробы к 5 мл трансформирующего раствора добавляют 20 мкл (0,02 мл) испытуемой крови, тщательно перемешивают и оставляют стоять в течение 10 мин. Затем колориметрируют при зеленом светофильтре (длина волны 500-
560 нм) в кювете с толщиной слоя 10 мм против контрольной пробы, в качестве которой берут трансформирующий раствор. Стандартная проба - это стандартный раствор гемоглобинцианида, ее исследуют в том же порядке, что и опытную пробу.

Количество гемоглобина (Н B , Г на 100 мл) определяют по формуле

Где Еоп - Оптическая плотность опытной пробы; Ест - оптическая плотность стандартной пробы; С - Концентрация гемоглобинцианида в стандартном растворе (59,75 мг на 100 мл); 0,001 - коэффициент для пересчета мг в 1 г; К- Коэффициент разведения крови (251).

Для установления количества гемоглобина в 1 л крови полученную цифру нужно умножить на 10.

Для определения количества гемоглобина в крови можно использовать метод Сали. Он менее точен, чем предыдущий, но прост в исполнении и широко распространен. Гемометр Сали (рис.18) состоит из трех пробирок одного диаметра, помещенных в штатив, задняя стенка которого выполнена из стекла молочного цвета. Средняя пробирка пустая, она отградуирована и предназначена для исследуемой крови. Обе боковые Пробирки запаяны и наполнены стандартным эталонным раствором, содержащим 167 г/л гемоглобина. К гемометру приложены капиллярная пипетка емкостью 20 мм3, пипетка для воды, стеклянная палочка для размешивания.

Принцип определения заключается в том, что под действием разведенной хлористоводородной (соляной) кислоты гемоглобин превращается в солянокислый гематин. Полученный раствор гематина разбавляют в градуированной (средней) пробирке дистиллированной водой до тех пор, пока его цвет не совпадет с цветом стандартных растворов. Количество гемоглобина устанавливают по уровню жидкости в градуированной пробирке в соответствии с имеющейся шкалой.

Для выполнения исследования в градуированную пробирку приливают 0,1 н. раствор хлористоводородной кислоты до метки 0. Из свежей капли крови кролика капиллярной пипеткой набирают 20 мкл. Оттуда кровь (без потерь) приливают к хлористоводородной кислоте в градуированной пробирке, тщательно встряхивают и оставляют стоять в штативе гемометра на 5-10 мин до образования прозрачной бурой жидкости - солянокислого гематина. Дистиллированную воду капают до тех пор, пока цвет жидкости не сравняется с цветом стандартных растворов гемометра Сали. При этих условиях количество гемоглобина будет одинаковым в стандарте и в исследуемой крови. Отсчет ведут по нижнему мениску жидкости в градуированной пробирке, шкала которой показывает абсолютное содержание (г/100 мл) гемоглобина в исследуемой крови. Далее рассчитывают содержание гемоглобина в ммоль/л. Используют формулу

Где В - Количество гемоглобина (г/100 мл, г%), 0,6206 - коэффициент пересчета. Например, 5 = 9 г%, тогда 9 ∙ 0,6206 = 5,6 ммоль/л (по системе СИ).

Вычисление цветового показателя (ЦП). Для определения степени насыщенности эритроцитов гемоглобином используют формулу

Где Hb 1 - среднее количество гемоглобина в норме (г/л); Н B 2 - Количество гемоглобина у исследуемого животного (г/л); Е1 - среднее число эритроцитов в норме (1 ∙ 1012/л); E2 - среднее число эритроцитов у исследуемого животного (1 ∙ 1012/л).

Вычисление среднего содержания гемоглобина в одном эритроците. Для определения этой величины используют данные о содержании эритроцитов и количестве гемоглобина в 1 мкл (1 л) крови. Для вычисления содержания гемоглобина в одном эритроците (СГЭ), выраженного в пг (1 пг = 1 × 1012 г), применяют формулу

Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) по методу Панченкова. Вычисляют скорость разделения цельной крови на плазму светло-желтой окраски и форменные элементы красной окраски за счет гемоглобина эритроцитов. Для определения берут градуированный стеклянный капилляр (от 0 до 100 мл), промывают его 5%-ным раствором лимоннокислого натрия. Набирают раствор до метки Р (высота 50 мм) и выпускают на часовое стекло. Из капли крови, взятой от кролика, в тот же капилляр дважды набирают кровь до метки К И приливают ее к раствору лимоннокислого натрия в часовое стекло, тщательно перемешивая жидкости. Затем капилляр наполняют цитратной кровью и укрепляют в штативе в строго вертикальном положении (рис.19). Результат оседания эритроцитов отмечают через час. Выражают СОЭ в мм/ч.

Рис.19. Штатив и капилляры для определения СОЭ

Таким образом, у контрольного и интактного кроликов определяют содержание в крови числа эритроцитов, количество гемоглобина, цветовой показатель, среднее содержание гемоглобина в одном эритроците, СОЭ. Используя полученные данные, составляют общую картину изменений красной крови при гемолитической анемии.

Оформление протокола опыта. Кратко описывают принципы определения показателей красной крови, использованные в эксперименте. Выполняют расчеты по рекомендованным формулам, фиксируют в протоколе. Полученные данные вносят в таблицу. Объясняют механизм изменений картины крови при гемолитической анемии.

Кровь - важнейший компонент любого организма. От ее состава зависит благополучие и здоровье любого живого существа, будь то человек или животное. Среди всех составляющих, входящих в состав крови, одну из наиболее серьезных функций выполняет гемоглобин.

Процентное содержание этого вещества является показателем благополучия или наличия патологии в организме, поэтому при анализе крови ему уделяется особое внимание.

Гемоглобин и его роль в организме человека и животного

Гемоглобин - это особый белок, в состав которого входит железо. Именно этот элемент обеспечивает окрашивание нашей крови в оттенки красного цвета. Он отвечает за транспортировку кислорода к органам и тканям организма, выполняет буферные функции. Гемоглобин наличествует в крови всех живых существ, обладающих системой кровообращения.

Легкие людей и животных наполняются кислородом, который через систему капилляров насыщает кровь. Гемоглобин, содержащийся в красных кровяных тельцах - эритроцитах - в связанном виде переносит кислород от легких во все части тела. В них кислород высвобождается, поддерживая процессы окисления, необходимые для нормальной жизнедеятельности клеток и функционирования органов.

Гемоглобин обладает свойством частично связывать углекислый газ и выводить его из организма, так что роль этого вещества чрезвычайно важна для здоровья любого живого существа.

Нормы гемоглобина у людей, кошек и собак

Количество гемоглобина у представителей разных полов отличается:

• мужчины - 130–160 г/л (минимум 120, максимум 180 г/л);
• женщины - 120- 50 г/л;
• дети: новорожденные - 145–225 г/л, от 3 месяцев до полугода - 95–135 г/л, с года до 18 лет - постепенное повышение показателей до «взрослого» уровня.

Во время беременности концентрация гемоглобина падает из-за повышенной нагрузки на организм женщины, поэтому для беременной важно следить за показателями крови.

У собак норма гемоглобина равна такой же норме у взрослого мужчины - 120–180 г/л, у щенят - 74–180 г/л.

У кошек показатели в норме ниже - 80–150 г/л.

Повышенный уровень гемоглобина

Рост показателей гемоглобина в большинстве случаев говорит о наличии патологических процессов в организме. В основном они связаны со сгущением крови и повышением концентрации эритроцитов.

Это состояние носит название «гиперхромия». Оно может проявляться как следствие следующих заболеваний или состояний:

1. Гипоксия, или кислородное голодание. Случается как у взрослых животных или людей, так и у детенышей или плода во время внутриутробного развития.
2. Физические перегрузки. Собаки часто проявляют чрезмерную активность, а кошек могут гонять дворовые псы или дети, что приводит не только к физическому переутомлению, но и к нарушению общего здоровья животного.
3. Стрессовые состояния. У собак и кошек это может быть перемена места жительства, новые владельцы, поездка в ветеринарную клинику и даже появление в семье ребенка или другого домашнего питомца.
4. Обезвоживание или дегидратация. Это состояние может быть вызвано как заболеванием, так и обычными причинами: слишком жаркой погодой, нахождением в теплом помещении, повышенной активностью, высокой сухостью воздуха, нехваткой питьевой воды, особенно при питании сухими кормовыми смесями.
5. Заболевания крови, например, эритроцитоз или гемолиз эритроцитов в сосудах.

Незначительное увеличение уровня гемоглобина не означает наличия серьезной проблемы, а может быть вызвано физиологическими причинами.

Для этого потребуется провести повторный анализ крови. Если он покажет норму, волноваться не о чем.

Сниженный уровень гемоглобина

Низкий уровень гемоглобина встречается чаще, но вызывает большую озабоченность. Это связано с тем, что пониженные показатели указывают на наличие серьезных нарушений в функционировании организма человека или животного:

1. Анемии. Значительное снижение показателей гемоглобина говорит о том, что ткани и органы страдают от острой нехватки кислорода. Это может привести к развитию множества опасных заболеваний.
2. Большая кровопотеря. В основном она встречается при сильных травмах, например, при падении кошки из окна или попадании собаки под колеса автомобиля.
3. Внутреннее кровотечение. Оно может быть следствием травмы и различных патологических процессов в органах, например, прободением язвы или протыканием стенки кишечника проглоченными костями с острыми краями.
4. Поражения костного мозга. Эти заболевания приводят к изменению формулы крови.
5. Заболевания почек. При них нарушается отток мочи, и кровь «отравляется» продуктами распада, что сказывается на ее составе и количестве гемоглобина.
6. Поражения печени.
7. Нарушения работы пищеварительного тракта.
8. Диабет.
9. Гормональные проблемы.
10. Гельминтоз.
11. Наличие вшей, клещей и блох в большом количестве.
12. Длительный прием антибиотиков.
13. Неправильное, несбалансированное питание с острой нехваткой железа.
14. Недоедание.
15. Злокачественные новообразования. Опухоли различных органов сильно ослабляют организм и сказываются на всех его функциях, а раковая интоксикация приводит к изменениям в составе крови.
16. Метастазы. Распространение злокачественных новообразований вызывает серьезные нарушения в работе всего организма и обязательно сказывается на крови.

При наличии анемии, которую раньше называли малокровием, человек или животное отличается слабостью, вялостью, инертностью, бледными кожными покровами и слизистыми оболочками.

Также появляется извращение вкуса - человек или животное может начать есть землю, мел, штукатурку и другие вещества, не пригодные в пищу. При наличии таких проявлений необходимо срочное обращение к врачу.

Способы нормализации показателей

Повышение уровня гемоглобина ни в коем случае нельзя пытаться лечить в домашних условиях, безразлично, идет ли речь о человеке или о кошке с собакой. Для этого необходимо полноценное обследование и определение причины состояния. Если речь идет о легком обезвоживании, для нормализации показателей достаточно просто увеличить объем чистой питьевой воды.

Но при длительном нахождении без воды животному или человеку нельзя позволять сразу обильно пить - это приведет к мучительной и быстрой гибели. Пить дают часто, но понемногу, чтобы исстрадавшийся организм привык к обилию жидкости и справился с ней.

Если у кошки или собаки выявлен низкий гемоглобин, лечение также связано с причиной такого состояния. Если оно не связано с болезнью, рекомендуется использовать следующие способы:

1. Увеличить процентное содержание красного мяса и печени - они богаты железом и витаминами группы В. Также можно по совету врача давать домашнему любимцу гематоген.
2. По врачебной рекомендации изменить питание и добавлять к нему витамины с повышенной концентрацией железа или же железосодержащие добавки.
3. Чаще гулять на улице, но не доводить собаку до усталости. Если речь идет о кошке, то позволять ей находиться на закрытом (безопасном) балконе или вывозить летом на дачу.
4. Делать с животным элементарную зарядку в виде игры.
5. Выполнять легкий массаж для стимуляции кровообращения.

Очень важно правильно составлять рацион кошки или собаки. Лучше всего проконсультироваться с опытным ветеринаром, который учтет возраст пса или кота, а также наличие различных заболеваний, травм и патологий.

1435 руб

Как краткое руководство и одновременно введение в патофизиологию эта работа восполняет существующий пробел по данной теме в области ветеринарной медицины. Она содержит основные сведения о патологических процессах при внутренних болезнях. Главное, чему уделяется внимание, это подробное объяснение патофизиологии заболеваний отдельных органов и функциональных нарушений и их основные связи у важнейших видов домашних животных. Комплексные связи поясняются многочисленными рисунками и схемами. В каждой главе за коротким введением в физиологию и регуляцию пораженного органа или функциональной системы следует перечисление диагностических методов и объяснение функционального значения видимых или измеримых данных обследования. Патологические нарушения рассматриваются как процессы, принимая во внимание причины (инфекционные, алиментарные, генетические и др.) и типичные клинические симптомы. В конце каждой главы даны краткие рекомендации по терапии данных заболеваний.

451 руб

Книга представляет собой перевод десятого, дополненного и переработанного издания руководства по болезням птиц, в подготовке которого приняли участие около 100 специалистов из девяти различных стран.
В этом руководстве наряду с изложением классических болезней птиц впервые рассматриваются болезни "сложной" или неизвестной этиологии, что поможет расширить кругозор ветеринарного врача в области патологии птиц и позволит поставить правильный диагноз. Несомненным достоинством данной книги является последовательное, подробное и детальное изложение материала по каждой болезни, начиная с этиологии, патогенеза, патологических изменений органов и тканей, заканчивая методами лечения и профилактикой. Хочется подчеркнуть, что особенное внимание в данном руководстве уделяется контролю за болезнями птиц в условиях промышленного птицеводства, где увеличение плотности поголовья или одновременное выращивание нескольких видов птиц может приводить к возникновению нестандартных ситуаций и появлению "новых" болезней.
Из-за большого объема для удобства пользования книга разделена на три части.

Все вышеизложенное позволяет рекомендовать данное практическое руководство по болезням домашних птиц не только ветеринарным врачам птицеводческих хозяйств, но и студентам, аспирантам, стажерам, обучающимся на ветеринарных факультетах и отделениях вузов.

4622 руб

Этот курс ветеринарной терапии продолжает традиции автора первого издания доктора Роберта У.Кирка, сохраненные редактором и составителем Джоном Д.Бонагура, доктором ветеринарной медицины. Редакторами-консультантами разделов книги и соответствующих приложений являются 20 самых известных ветеринарных врачей мира, обладающих большим опытом клинической практики. Настоящее издание содержит более 1300 страниц, которые разделены на 14 разделов, посвященных широкому спектру болезней домашних животных. Конкретные вопросы современной практики лечения домашних животных подробно описываются в 310 отдельных главах, принадлежащих перу почти 400 авторов. Рассматриваются:
вопросы специальной терапии;
неотложной помощи;
токсикологии;
иммунологии;
инфекционных заболеваний;
системные нарушения у домашних животных: заболевания сердца, почек, печени, легких, репродуктивных органов и прочее;
заболевания птиц и экзотических домашних животных.

Авторы придали главам книги удобную для чтения структуру, включающую в себя описание характерных клинических симптомов заболеваний и функциональных нарушений, основы рациональной терапии, а также четкие практические советы и рекомендации по лечению. В большинстве глав речь идет о лечении конкретного заболевания или нарушения. В некоторых главах основное внимание уделяется важным принципам терапии или общим подходам к лечению заболеваний мелких или экзотических домашних животных.

Для удобства работы книга выпущена в двух частях, которые являются единым целым изданием.

4120 руб

Книга "Скорая помощь и интенсивная терапия мелких домашних животных" представляет собой справочное пособие, посвященное оказанию помощи при наиболее часто встречающихся критических состояниях. Книга состоит из двух разделов. Вначале описываются основные принципы начальной стабилизации и поддержания жизненно важных функций всего организма животного, а затем системный подход к наиболее часто встречающимся критическим состояниям. Каждый раздел начинается с клинического подхода к пациенту, у которого наблюдаются признаки критического состояния по каждой системе организма, а затем описываются схемы лечения специфических заболеваний. Это руководство также содержит информацию по мониторингу и тактике ведения критически больных пациентов.
Материал в книге излагается в виде небольших тезисов, чтобы можно было быстро отыскать необходимые сведения. Вся информация пронумерована и содержит многочисленные ссылки, чтобы обеспечить как можно более полное описание различных неотложных состояний. В книге также приведено много полезных формул, таблиц, иллюстраций и указаны дозы препаратов.

Этот справочник обязательно должен быть у любого ветеринарного специалиста скорой помощи - как у только что окончившего обучение, так и у профессионала, так как под рукой всегда должен быть источник, в котором собрана вся необходимая информация.

1809 руб

Этот цветной атлас представляет собой иллюстрированный сборник вопросов и ответов касающихся многих аспектов неврологии мелких домашних животных. Эту книгу можно пользовать как для проверки своих знаний, так и для обучения. Описание результатов не логического обследования представлено в той форме, которая наиболее часто используется в научной и учебной литературе.

Благодаря тому, что вопросы различаются по степени сложности, книга может быть полезна как студентам, так и практикующим ветеринарным врачам.

859 руб

В книге собраны рекомендации по профилактике и лечению наиболее распространенных инфекционных, инвазионных, грибковых, гельминтовых, а также незаразных болезней сельскохозяйственных животных, пчел и птиц, домашних животных: собак, кошек, певчих и декоративных птиц, аквариумных рыбок и т. д.

Рассматриваются вопросы ветеринарной санитарии и зоогигиены, приводятся рекомендации по организации правильного питания животных и их содержанию. Рассмотрены вопросы по организации ветеринарного бизнеса, маркетинга, менеджмента, а также вопросы планирования и определения экономической эффективности ветеринарных предприятий.

Для ветеринарных специалистов и широкого круга читателей.

150 руб

68. Колориметрический способ определения количества гемоглобина в крови. Количество гемоглобина в крови в норме у разных видов животных.

Объект исследования – кровь животных.

Материалы и оборудование – пробирки, гемометр Сали, пипетка от гемометра Сали, 0,1 н. раствор соляной кислоты, дистиллированная вода, вата, бинт.

Ход работы. Колориметрическое определение гемоглобина производится гемометром Сали, в комплект которого входят микропипетка и стеклянная палочка. Прибор состоит из пластмассового корпуса с тремя гнездами для пробирок. В задней стенке корпуса вмонтировано матовое белого цвета стекло, рассеивающее свет. В боковые гнезда вставлены одинакового размера запаянные пробирки со стандартно окрашенным раствором, а в среднее гнездо градуированная пробирка для исследуемой крови. На всех пробирках имеются две круговые контрольные метки, нижняя из них соответствует ѐмкости 0,2 мл, верхняя - 2 мл. Для определения гемоглобина в градуированную пробирку гемометра наливают 0,1 н. раствора соляной кислоты до нижней метки. В капиллярную пипетку, прилагаемую к прибору, насасывают 20 мм3 (0,02 мл) крови. Конец пипетки вытирают ватой, опускают ее на дно пробирки в раствор соляной кислоты и выдувают кровь. Не вынимая пипетки из пробирки, несколько раз промывают ее верхней частью раствора. После этого содержимое пробирки тщательно перемешивают и оставляют на 5 минут в штативе для полного гемолиза эритроцитов. Гемоглобин, вступая в реакцию с соляной кислотой, образует солянокислый гематин, который имеет коричневую окраску. Через 5 мин в пробирку по каплям, при постоянном помешивании стеклянной палочкой, добавляют дистиллированную воду до тех пор, пока цвет жидкости не совпадет с цветом стандартного раствора в пробирках, расположенных по бокам гемометра. Затем пробирку с полученным рабочим раствором достают из гемометра и смотрят на выгравированную на ней шкалу. По нижнему мениску жидкости определяют содержание гемоглобина в г%, если полученную цифру умножить на 10, то будет выражение количества гемоглобина в г.

Определение по методу Сали .

Колориметрическое определение гемоглобина производится гемометром Сали. Этот метод основан на образовании солянокислого-гематина из деци нормального раствора соляной кислоты и гемоглобина, который имеет коричневую окраску и доводится дистиллированной водой до цвета стандартных растворов. Гемометр состоит из штатива с тремя гнездами (рис).

Рис. Гемометр Сали.

Задняя стенка штатива представляет собой пластинку из матового стекла. В боковые гнезда вставлены одинаковые запаянные пробирки - цветные стандарты. Среднее гнездо с градуированной пробиркой для исследуемой крови. На пробирке нанесена шкала, показывающая количество гемоглобина в грамм % (т. е. сколько грамм гемоглобина содержится в 100 мл. крови). В градуированную пробирку наливают 0.1% раствор HCl до нижней круговой метки (0,2 мл). В капиллярную пипетку набирают 0,02 мл крови. Кровь, приставшую к кончику капилляра, удаляют ваткой. Опускают капилляр на дно градуированной пробирки и осторожно выдувают из него кровь так, чтобы верхний слой раствора остался прозрачным. Не вынимая капилляраиз верхнего слоя раствора, 2-3 раза промывают его. После этого содержимое пробирки тщательно перемешивают и оставляют на 5 минут в штативе для полного гемолиза эритроцитов. Гемоглобин, вступая в реакцию с соляной кислотой, образует солянокислый гематин, который имеет коричневую окраску. Затем к раствору по каплям прибавляют дистиллированную воду и перемешивают стеклянной палочкой до получения одинакового окрашивания со стандартом. Деление на шкале, до которого поднялась жидкость, позывает количество гемоглобина. Грамм-процент переводят умножения полученный результат на 10, что соответствует содержанию гемоглобина в 1 л крови (г/л).

Состав крови у здоровых сельскохозяйственных животных

69. Определение времени свертывания крови. Противосвертывающая система крови в организме Свертывание крови – защитная биологическая реакция, предохраняющая организм животного и человека от потери крови. Свертывание крови является сложным процессом, в котором участвует свыше 15 факторов (рис.). Свертывание – переход крови из жидкого состояния в желеобразное. Оно происходит при повреждении сосуда и сопровождается образованием тромба. При травме происходит спазм сосуда и выделение серотонина – это приводит к гемостазу. Кровь может свернуться и в неповрежденном кровеносном сосуде, что вызывает нарушение ее циркуляции и кровоснабжения отдельных тканей и органов, поэтому в организме имеется противосвертываюшая система крови, препятствующая свертыванию ее в кровеносных сосудах.

Рис. Классическая схема свертывания крови Шмидта - Моравица.

Нанести по одной капле крови, вытекающей из надрезанного уха животного, на три предметных стекла. Одно стекло поместить в термостат при +40 о С, другое стекло положить на стол (при комнатной температуре), третье - на снег. Через каждую минуту наклонять стекла с кровью и повторять до тех пор, пока кровь не свернется. Определить время свертывания крови у различных животных. К противосвертывающей системе относят: Антитромбопластины, антитромбины, гепарин, различные соли кислот. Система свертывания находиться под постоянным контролем нейрогуморальной регуляции(при страхе, боли, теипиратуре свертывание крови усиливается. Адреналин и норадреналин освобождают тромбопластин из стенок сосудов).

Определение содержания гемоглобина в крови животных является одним из самых важных и массовых показателей. Для определения гемоглобина чаще всего анализируют производные гемоглобина, образовавшиеся в процессе его окисления и присоединения к гену различных химических групп, приводящих к изменению валентности железа и окраски раствора .

Для рутинных лабораторных исследований наиболее предпочтительны колориметрические методы, как наиболее дешевые, простые и

быстрые в исполнении. Кровь животного - это нормальная смесь производных гемоглобина с различными спектрами поглощения. При количественном определении гемоглобина колориметрическими методами возникает проблема в выборе реагента, который превращал бы все производные гемоглобина только в одну форму перед фотометрическим анализом. Лучшими методами, количественно превращающими гемоглобин в его производные, оказались гемиглобинцианидный (HbCN), гемихромный (HbChr) и гемиглобиназидный (HbN3), которые при фотометрировании дают наименьшую ошибку определения среди других методов анализа .

Повышение: некоторые формы гемобластозов, в частности эритремия, обезвоживание организма.

Понижение (анемия): различные виды анемий, в том числе вследствие кровопотери.

Принцин гемиглобинцианидного метода основан на переводе всех форм гемоглобина в одну - гемиглобинцианид. Перевод гемоглобина в гемиглобинцианид осуществляется при его взаимодействии с трансформирующим раствором, содержащим феррицианид калия, цианид калия, дигидрофосфат калия и неионный детергент. Дигидрофосфат калия поддерживает уровень рН, при котором реакция проходит за 3-5 минут. Детергент усиливает гемолиз эритроцитов и предотвращает мутность, связанную с белками плазмы. Феррицианид калия окисляет все формы гемоглобина в метгемоглобин, который образует с цианистым калием гемиглобинцианид, имеющий красноватый цвет, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации гемоглобина в пробе.

Принцип гемихромного метода основан на переводе всех форм гемоглобина в одну - гемихром. При взаимодействии гемоглобина с трансформирующим раствором, содержащим жирные кислоты с феррицианидом калия или додецилсульфат натрия, происходит его превращение в окисленную низкоспиновую форму - гемихром (HbChr), имеющую красноватый цвет, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации гемоглобина в пробе.

При широкомасштабных испытаниях гемихромного метода было показано, что в интервале концентраций гемоглобина от 40 до 200 г./л калибровочные графики гемиглобинцианида и гемихрома представляют прямую линию, выходящую из начала координат, а близкие углы наклона прямых указывают на сопоставимость обоих методов.

При определении гемоглобина двумя методами Ахрем А.А. с соавторами показали, что большую точность (и меньшую s) дает гемихромный метод. Авторы предполагают, что SDS способствует солюбилизации мембранных частиц и препятствует адсорбции белка на стекле пробирок и кювет, тем самым обеспечивается высокая точность анализа .

Сравнительная оценка результатов определения гемоглобина в крови двумя методами показала, что результаты сопоставимы, а коэффициент корреляции методов составляет 0,99. Таким образом, гемихромный метод определения гемоглобина в крови обладает всеми достоинствами гемиглобинцианидного метода, которые дополняются отсутствием в составе трансформирующего реагента высокотоксичных цианидов и других ядовитых веществ.

Выполнение. В сухие чистые пробирки дозатором внести по 5 мл трансформирующего раствора, к ним прилить по 20 мкл крови поверенной пипеткой Сали или механическим дозатором со всеми предосторожностями, перечисленными в предыдущем разделе. Пробу тщательно перемешать на микровстряхивателе или вручную до достижения гомогенного раствора. Растворы выдержать при комнатной температуре время, указанное в инструкции к набору, и измерить оптическую плотность растворов на поверенном, калиброванном приборе в кювете, имеющей нулевое поглощение дистиллированной воды относительно аналогичной контрольной (с длиной оптического пути 10 мм). Окраска растворов устойчива до 5 час и более, что позволяет проводить измерения в любое удобное время в этом временном интервале. Расчет содержания гемоглобина в крови произвести по калибровочному графику или фактору, определенному на данном приборе. Если соблюдены все перечисленные условия подготовки и проведения анализа, описанные выше, погрешность определения гемоглобина в крови не будет превышать ±2%. Кратко суммируем источники возможных ошибок при определении гемоглобина: использование некалиброванных пипеток и несовершенная техника дозирования проб крови; применение неповеренного оборудования, не обеспечивающего линейную зависимость оптической плотности от концентрации гемоглобина в требуемой области измерений; нестабильность прибора; отсутствие внутрилабораторного контроля качества; недостаточная чистота кювет, особенно проточных; ошибки при построении калибровочных графиков и расчете факторов; использование контрольных растворов гемоглобина низкого качества; ошибки оператора, ошибки, допускаемые на преаналитической фазе .